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La cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) è un metodo comune di analisi di laboratorio in cui un campione viene separato nei suoi componenti chimici mentre passa attraverso una colonna. Questa colonna è riempita con un materiale poroso, tipicamente gel di silice. Una colonna di fase inversa standard, come C8, a volte può ostruire o diventare contaminata. Queste colonne possono essere recuperate utilizzando tecniche molto semplici.
indicazioni
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Disattiva la colonna e inverti la sua posizione, in modo che la fase mobile ora entri attraverso quello che è normalmente l'uscita della colonna. Attaccare una presa all'altra estremità della colonna (che era l'entrata originale) e lasciarla scaricare in uno scarico.
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Pompare una serie di solventi in ordine decrescente di polarità. Una serie di base raccomandata è quella di iniziare con metanolo, quindi passare ad acetonitrile, quindi acetonitrile / isopropanolo (75:25), isopropanolo, cloruro di metilene ed esano. Se la fase mobile che era nella colonna era assorbente, si raccomanda un passaggio con acqua prima in metanolo. È sufficiente un flusso da uno a due millilitri al minuto e pompare circa dieci colonne di volume di ciascun solvente. La colonna del volume è lo spazio interno della colonna ed è calcolata da (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), dove DI è il diametro interno della colonna e L è la lunghezza.
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Pompare altri dieci volumi di isopropanolo attraverso la colonna per prepararlo per l'uso con la fase mobile originale. Se la fase mobile originale è stata ammortizzata, pompare anche acqua attraverso la colonna dopo l'isopropanolo, prima di tornare alla fase mobile originale.
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Disinnestare la colonna, invertirla e reinserirla in modo che si trovi nella sua posizione originale (in modo che la fase mobile entri nella parte destra della colonna). Ricollegare l'uscita dell'altoparlante al rilevatore.
Recupero della colonna
suggerimenti
- Se questo processo non pulisce a fondo la colonna, si può usare una miscela 50:50 di dimetilsolfossido (DMSO) e dimetilformammide (DMF). Residui di proteine e ioni metallici possono richiedere altri tipi di solventi, come reagenti risparmiatori di ioni o una soluzione di acido tetraacetico etilendiammina (EDTA).
avvertimento
- In alcuni apparecchi, la colonna vertebrale avrà un setaccio di metallo grezzo come un ingresso. In questo caso, il ripristino della colonna consentirà alla fase stazionaria di lasciare la colonna e ciò non è consigliato. Consultare il rivenditore se non si è sicuri.
- Il solvente utilizzato in questo processo è potenzialmente tossico se ingerito e inalato. Utilizzare le normali precauzioni di laboratorio durante la manipolazione.
Cosa ti serve
- Dispositivo HPLC
- acqua
- metanolo
- acetonitrile
- isopropanolo
- Cloruro di metilene
- esano
