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La cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è uno strumento utilizzato per separare le sostanze da una miscela. La separazione e l'identificazione di alcune sostanze chimiche avviene principalmente nella colonna cromatografica del sistema. Molti tipi di colonne sono disponibili per CLAE e ciascuno viene utilizzato per un tipo specifico di analisi. La colonna C18 è la più forte non polare generalmente utilizzata. Dopo un uso continuo per un periodo di tempo prolungato, la portata del solvente attraverso di esso diminuisce e il tempo di analisi aumenta. Un'altra causa della diminuzione dei tempi di analisi è la presenza di campioni che lasciano piccole quantità di sostanze chimiche nel materiale della colonna, riducendo la capacità di separarli. Il ripristino della sua superficie può essere effettuato trattando il materiale con una serie di solventi specifici per ripulirlo da eventuali campioni residui e rivitalizzare il materiale di supporto.
Passo 1
Rimuovere la colonna C18 dalla direzione del flusso e posizionarla nella direzione opposta. Riportare il solvente attraverso di esso allevierà l'effetto di accumulo che si verifica nel tempo. Bisogna fare attenzione a non lasciare troppo materiale accumulato all'estremità della colonna. Alcune fabbriche utilizzano una maglia più grande nella parte superiore in modo che quando il flusso cambia direzione, la maglia si trova nella posizione inferiore. Questo metodo di ripristino è chiamato inversione di flusso. Per evitare che l'accumulo fluisca al rilevatore del sistema e possa causare un'ostruzione, lasciarlo funzionare senza il rilevatore collegato e dirigere il flusso dalla colonna allo smaltimento.
Passo 2
Posizionare il tubo di passaggio del solvente in una serie di solventi per eluire l'eventuale composto trattenuto nella colonna nella direzione opposta. Questi solventi variano nelle loro caratteristiche idrofile. Variando questi si eluiranno composti di natura idrofila altrettanto diversa. Utilizzare 50 ml di ciascuno dei seguenti solventi, successivamente: acqua (se si utilizza un tampone), metanolo, isopropanolo, diclorometano, esano, diclorometano e isopropanolo.
Passaggio 3
Sostituisci la colonna nella direzione corretta e fai scorrere il solvente attraverso di essa. Utilizzare almeno 75 ml per lavarlo prima di procedere. Provalo con uno schema che hai usato quando era nuovo e controlla i risultati. Prestare attenzione quando si raggiungono i punti di ritenzione massimi e il tempo totale di analisi. Il grado in cui questi attributi corrispondono al test iniziale quando era ancora nuovo indicherà il grado in cui la colonna è stata ripristinata. Se i risultati non sono soddisfacenti, sostituire la colonna con una nuova e gettare via quella vecchia.
