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Quando si frequenta una microbiologia di livello superiore, l'insegnante potrebbe richiedere di completare un progetto in cui è necessario identificare un batterio sconosciuto attraverso una serie di test. Per identificare correttamente questi batteri, è necessario disporre di tutte le attrezzature di laboratorio appropriate e conoscere varie procedure di laboratorio. È anche vantaggioso avere un diagramma di flusso dei batteri e dei loro test di laboratorio, in modo da poter identificare i batteri.

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Le piastre di coltura consentono ai batteri di essere isolati per identificare facilmente le loro caratteristiche (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Preparare tutti i test prima di iniziare l'esperimento. Ciò include la preparazione delle piastre e dei tubi di agar e la preparazione degli indicatori necessari, come il reagente di Kovac. Etichettare tutte le provette e le piastre in modo appropriato in modo che non si mescolino, causando risultati errati.

2. Semina i tuoi batteri. Questo determinerà la forma e il colore del batterio, come il gram-positivo (viola), il gram-negativo (rosso o rosa), le noci di cocco (circolari), le spirochete (a spirale) o le barre. Per seminare il batterio avrete bisogno di una lama pulita, acqua, viola cristallizzato, iodio, candeggina, safranina, carta assorbente, microscopio ottico e alcuni asciugamani di carta. Dopo aver flambato il ciclo, usalo per posizionare una goccia d'acqua sulla lama. Flambate nuovamente il cappio e poi mettete una piccola quantità di batteri sconosciuti nella goccia d'acqua. Passare la lama sulla fiamma alcune volte per asciugare e attaccare completamente i batteri alla lama. Coprirlo con viola cristallizzato, lasciarlo per un minuto e poi lavarlo delicatamente. Quindi coprire la lama con iodio. Lasciare agire per 30 secondi e quindi lavare. Mettere un pezzo di carta assorbente sulla lama per rimuovere l'acqua in eccesso. Quindi versare la candeggina sulla lama. Dopo cinque secondi, lavare per rimuovere la candeggina. Infine, coprire la lama con safranin. Dopo 40 secondi, lavare la lama e asciugarla delicatamente con un tovagliolo di carta. Mettere una goccia di olio sul sito dei batteri sulla diapositiva e guardare sotto il microscopio. Nota la forma e il colore dei batteri visibili.

   
   

3. Metti alla prova l'ossidasi nei tuoi batteri. Per questo avrete bisogno di un filtro di carta, un reagente ossidasi, E. coli, Pseudomonas e i suoi batteri sconosciuti. In questo test, E. coli e Pseudomonas sono i controlli. Il tuo batterio dovrebbe avere meno di 24 ore per questo test. Flambare la maniglia e posizionare una piccola quantità di ciascun batterio su un pezzo di filtro di carta. Utilizzare un contagocce per posizionare una goccia di reagente ossidasi in ciascun batterio. Dopo 10 secondi, annota il colore di ciascun batterio. E. coli darà un risultato positivo e Pseudomonas darà un risultato negativo. I batteri positivi per l'enzima citocromo ossidasi diventeranno viola e i batteri negativi non cambieranno colore.

4. Prova per idrogeno solforato (SIM). Scorri la maniglia e usala per raccogliere alcuni batteri dal piatto. Inoculare la provetta con i batteri e coprirla. Lasciare questo tubo nel forno per 18-24 ore a 37 ° C. Identifica se il batterio è mobile (ha flagello). Se c'è crescita e nuvolosità lontano da dove hai inoculato i batteri, è mobile. Quindi, inserire due gocce di reagente Kovac nel tubo. Se ha cambiato colore al rosso o al rosa, il suo batterio è positivo per questo test e contiene triptofano, quindi è un produttore di indolo. Se il tubo diventa nero, i suoi batteri producono idrogeno solforato.

   
   

5. Eseguire un test di citrato di Simmon. Inoculare i batteri in due provette con l'agar di Simmon. Lasciarli in forno per 18-24 ore a 37 ° C. L'agar è inizialmente verde, ma se i batteri usano il citrato come fonte di carbonio, il colore cambierà da verde a blu. Il blu è il risultato positivo. Se i tubi rimangono verdi, i loro batteri sono negativi per l'uso di citrato come singola fonte di carbonio.

6. Eseguire un test metil red (MRVP). Per questo test, sono necessarie due provette contenenti una soluzione di peptone, tamponi e destrosio (o glucosio). Inoculare ciascuna provetta con i batteri sconosciuti e tornare alla stufa per 18-24 ore a 37 ° C. Quando è pronto, aggiungi tre gocce di rosso di metile a un tubo. Questo sarà il tuo tubo MR. Se il tubo cambia da giallo a rosso, il suo batterio è positivo e utilizza un percorso di acido misto durante la fermentazione (si producono acido lattico, acetico e acido formico). Nella seconda provetta, aggiungere tre gocce del reagente VP. Se il tubo diventa rosso, i batteri sono positivi per la formazione di diacetile, un prodotto di fermentazione. Se il tubo diventa marrone, il batterio è negativo.

7. Trova i tuoi batteri notando i risultati positivi e negativi nel diagramma di flusso.